人 5α还原酶（5AR） 酶联免疫吸附测定试剂盒
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 实验所需自备试验器材：

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、

200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

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样本处理及要求：

1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时

或 4℃过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或

将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在

采集后的 30 分钟内于 2-8℃ 1000×g 离心 15 分钟，取上

清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免

反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除

残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重

后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按

1:9 的重量体积比，比如 1g 的组织样品对应 9mL 的 PBS，

具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在

PBS 中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充

分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超

声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于 5000×g 离心 5~10

分钟，取上清检测。

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4. 细胞培养物上清：请 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检

测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

5. 其它生物标本：1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测。

6. 样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品保存：样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于

4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃

（1 个月内检测），或-80℃（6 个月内检测），避免反复冻

融，标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进

行此项检测。

注意事项：

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所

有试剂都必须在使用达到室温 20-25℃。使用后立即冷

藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物确保尽

量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不

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能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强

烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物

活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的

程序处理样品和检测装置。

原创作者：上海初态生物科技有限公司